HiScript®III Reverse Transcriptase
更高效的第三代反轉錄酶（逆轉錄酶），更高的反應溫度有助于打開RNA的二級結構，更高的反應效率，質量同Superscript III反轉錄酶。
| 貨號 | 規格 | 價格 |
| 180101 | 10000U(200U/ul) | 900.00元 |
| 180102 | 50000U(200U/ul) | 4000.00元 |
廣泛的模板兼容性：可兼容動物、植物、細胞、病毒等多種模板
超強的雜質耐受度：對于常見雜質（乙醇、異丙醇、水平衡酚、腐殖酸）均具有超強的耐受度
卓越的逆轉錄效率：逆轉率效率等同于國際著名公司的Superscript III反轉錄酶，承諾質量完全一致，可以直接替代。
HiScript® III Reverse Transcriptase對于復雜二級結構的RNA，推薦的反應溫度為50~55℃，對于存在復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至60~65℃，避免RNA復雜二級結構對cDNA合成的抑制，可有效合成高質量的cDNA。本產品可以合成長達12Kbp的cDNA，除此之外，本產品仍具有優越的持續合成能力和超強的雜質耐受度。
| 組分 | 180101 (10000 U) |
| 5×HiScript®III Buffer | 500 μl |
| HiScript®III Reverse Transcriptase (200 U/μl) | 50 μl |
- 30℃~- 15℃保存
附件：實驗操作步驟
第一鏈cDNA合成
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。）
組分 | 使用量 |
Rnase free ddH2O | to 12μL |
Oligo(dT)18 (50 μM) | 1 μL |
Or Random Primers (50 μM) | or 1μL |
Or Gene Specific Primers (2 μM) | or 1μL |
Total RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
dNTP mix | 1μL |
65℃加熱5 min，迅速置于室溫2 min。簡短離心收集反應液后，加入下表中的逆轉錄反應液，并輕輕吹打混勻。
2. 逆轉錄反應體系配制（20μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應液 | 12μL |
5× HiScript Buffer | 4μL |
DTT | 2μL |
HiScript®III Reverse Transcriptase(200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 μL |
3. 逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃(可選) | 5 min |
50℃-55℃ | 15-50 min |
85℃(可選) | 5 min |
【注】：1）當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo(dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略。
2）逆轉錄溫度：推薦使用50-55℃。對于高GC含量模板或者復雜二級結構的模板，可將逆轉錄溫度提高至60-65℃。
3）85℃加熱5 min，目的是使逆轉錄酶失活，對于后續需要進行其他實驗的，比如二鏈合成等，此步驟需要省略。
※ 逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
