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大腸桿菌 DNA 連接酶利用 β-NAD 在雙鏈 DNA 之間催化3′ 羥基端和5′ 磷酸端形成磷酸二酯鍵。單鏈核酸不是這種酶的底物。應用:第二鏈 cDNA 合成 (1)。無需平末端連接時,可替代 T4 DNA 連接酶(2)。來源:從大腸桿菌594純化(Su- ),承載 λ 溶素原 gt4lop-11 lig+ S7 (3)。性能和質量測試:脫氧核糖核酸內切酶、3′ 和5′ 脫氧核糖核酸外切酶分析;經過連接效率測試。單位定義:一個單位是在包含 0.12 ′M (300 μg/ml) 5′ 末端濃度的 20 μl 最終體積中,在 16°C 下經 30 分鐘完成 Hind III-酶切 λ DNA 50% 連接所需的酶量。單位反應條件:18.8 mM Tris-HCl (pH 8.3),90.6 mM KCl,4.6 mM MgCl2,3.8 mM DTT,0.15 mM λ-NAD,10 mM (NH4 )2 SO4,20 μl,經1小時,16°C。