Hiscript II Reverse Transcriptase 逆轉錄酶是一種以單鏈 RNA、DNA 或 RNA:DNA 雜交體為模板合成互補 DNA 鏈的重組 DNA 聚合酶。與 AMV RT 相比,莫洛尼鼠白血病病毒逆轉錄酶 (M-MLV RT) 缺乏 DNA 核酸內切酶活性,RNase H 活性較低。該酶的特點:
•熱穩定性—在37°C-42℃ 下活性極佳
•cDNA 大小—M-MLV 可用于合成長達 7 kb 的第一鏈 cDNA
•應用—合成第一鏈 cDNA、引物延伸、dsDNA 測序、cDNA 文庫和 RT-PCR
來源
純化自表達質粒所帶 M-MLV pol 基因的大腸桿菌
性能和質量檢測
SDS-PAGE 純度;脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶及核糖核酸酶檢測;cDNA 產物的得率和長度
單位定義
一個單位的Hiscript II Reverse Transcriptase 是指在 37°C、10 分鐘條件下使用 poly(A)oligo(dT)25 作為模板-引物將 1 nmole 脫氧核糖核酸摻入酸性可沉淀材料所需的酶量。
單位反應條件
50 mM Tris-HCl(pH 值 8.3)、40 mM KCl、6 mM MgCl2、1 mM DTT、0.5 mM [3H]dTTP、0.1 mM poly(A)、0.1 mM oligo(dT)25、0.1 mg/mL BSA 和酶,50 μL,10 min,37°C。